পানীয়গুলিতে এইচপিএলসি ক্যাফিন বিশ্লেষণঃ ওয়ানাই এলসি 3500 ডিএডি পদ্ধতি GB 5009.139-2014 অনুযায়ী বৈধ

ক্যাফেইন হল কফি বিন, চা পাতা এবং কোকোতে পাওয়া একটি প্রাকৃতিকভাবে ঘটে যাওয়া মিথাইলক্সান্থিন অ্যালকালয়েড এবং এটি কার্বনেটেড কোমল পানীয়, এনার্জি ড্রিঙ্কস, চা পানীয় এবং রেডি-টু-ড্রিঙ্ক কফিতে সর্বাধিক ব্যবহৃত কার্যকরী সংযোজন এবং বৈশিষ্ট্যযুক্ত স্বাদ যৌগগুলির মধ্যে একটি। পরিমিত গ্রহণ সতর্কতা তীক্ষ্ণ করে এবং ক্লান্তি দূর করে, তবুও অতিরিক্ত বা দীর্ঘমেয়াদী সেবন বুক ধড়ফড়, অনিদ্রা এবং স্নায়বিক উত্তেজনা সৃষ্টি করতে পারে এবং গর্ভবতী মহিলা, শিশু এবং কার্ডিওভাসকুলার রোগে আক্রান্ত ব্যক্তিদের মতো সংবেদনশীল গোষ্ঠীগুলি অনেক কম ডোজ সহ্য করে। তাই জাতীয় খাদ্য নিরাপত্তা মান পানীয়ের জন্য ক্যাফিনের স্পষ্ট সীমা নির্ধারণ করে।

চীনে, GB 5009.139-2014, পানীয়গুলিতে ক্যাফিনের নির্ধারণের জন্য জাতীয় খাদ্য নিরাপত্তা মান, পানীয় ম্যাট্রিক্সে ক্যাফিনের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য বিধিবদ্ধ ভিত্তি। হাই পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) জটিল ম্যাট্রিক্স যেমন কম্পোজিট ড্রিঙ্কস, দুধ-যুক্ত পানীয় এবং ভেষজ কার্যকরী পানীয়ের জন্য পছন্দের কৌশল হয়ে উঠেছে, এর চমৎকার পৃথকীকরণ, ম্যাট্রিক্স হস্তক্ষেপের প্রতি শক্তিশালী প্রতিরোধ এবং অত্যন্ত নির্ভুল পরিমাণের জন্য ধন্যবাদ।

একজন পানীয় প্রস্তুতকারকের দুটি খুব ভিন্ন পণ্য লাইনে ক্যাফিনের মাত্রা যাচাই করার প্রয়োজন ছিল: একটি কার্বনেটেড কোলা-টাইপ পানীয় এবং একটি দুধ চা পণ্য। দুটি ম্যাট্রিক্সের জন্য ভিন্ন প্রস্তুতি কৌশলের প্রয়োজন: কার্বনেটেড নমুনাগুলি অবশ্যই ডিগ্যাস এবং পরিষ্কার করতে হবে, যখন দুধ-যুক্ত পণ্যগুলির ইনজেকশনের আগে প্রোটিন অধঃক্ষেপণ প্রয়োজন। উভয়কেই ক্যালিব্রেশন রেঞ্জের মধ্যে স্বাচ্ছন্দ্যে বসতে হয়েছিল এবং ক্রোমাটোগ্রাফিক সিস্টেমকে দীর্ঘ ইনজেকশন সিকোয়েন্স জুড়ে ম্যাট্রিক্স বিল্ড-আপ থেকে মুক্ত থাকতে হয়েছিল।

বিকারকগুলির মধ্যে ক্যাফেইন রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড, HPLC-গ্রেড মিথানল, ম্যাগনেসিয়াম অক্সাইড, ট্রাইক্লোরোঅ্যাসেটিক অ্যাসিড দ্রবণ এবং আল্ট্রাপিউর জল অন্তর্ভুক্ত ছিল।

• স্টক দ্রবণ (2.0 মিলিগ্রাম/মিলি): 20 মিলিগ্রাম ক্যাফেইন স্ট্যান্ডার্ড, 0.1 মিলিগ্রাম পর্যন্ত ওজন করা, মিথানলে দ্রবীভূত এবং 10 মিলি পর্যন্ত তৈরি করা; 4 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ছয় মাসের শেলফ লাইফ সহ সংরক্ষণ করা হয়।
• মধ্যবর্তী দ্রবণ (200 ug/mL): 5.0 মিলি স্টক 50 মিলি পর্যন্ত জল দিয়ে পাতলা করা; 4 ডিগ্রি সেলসিয়াসে এক মাসের শেলফ লাইফ সহ সংরক্ষণ করা হয়।
• ক্যালিব্রেশন ওয়ার্কিং সলিউশন: 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 এবং 10.0 মিলি মধ্যবর্তী দ্রবণ 10 মিলি পর্যন্ত পাতলা করা, 10.0, 20.0, 40.0, 100 এবং 200 ug/mL প্রদান করে; বিশ্লেষণের দিনে তাজা প্রস্তুত করা হয়।

কোলা-টাইপ পানীয়: 40 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 5 মিনিটের জন্য একটি আল্ট্রাসনিক বাথে নমুনাটি ডিগ্যাস করুন। 5 গ্রাম ওজন করুন (0.001 গ্রাম পর্যন্ত নির্ভুল), জল দিয়ে 5 মিলি পর্যন্ত পাতলা করুন যাতে ক্যাফিনের ঘনত্ব ক্যালিব্রেশন রেঞ্জের মধ্যে পড়ে, ভালভাবে ঝাঁকান, 0.5 গ্রাম ম্যাগনেসিয়াম অক্সাইড যোগ করুন, আবার ঝাঁকান এবং স্থির হতে দিন। ইনজেকশনের আগে সুপারনাট্যান্টকে 0.45 um মেমব্রেন দিয়ে ফিল্টার করুন।

দুধ-যুক্ত কফি এবং চা পানীয়: 1 গ্রাম ওজন করুন (0.001 গ্রাম পর্যন্ত নির্ভুল), ট্রাইক্লোরোঅ্যাসেটিক অ্যাসিড দ্রবণ দিয়ে 10 মিলি পর্যন্ত পাতলা করুন, ভালভাবে ঝাঁকান এবং প্রোটিন অধঃক্ষিপ্ত হওয়ার জন্য দাঁড়াতে দিন, তারপরে সুপারনাট্যান্টকে 0.45 um মেমব্রেন দিয়ে ফিল্টার করুন।

পিকগুলি প্রতিসম ছিল এবং তাত্ত্বিক প্লেট সংখ্যা বেশি ছিল। ব্ল্যাঙ্ক সলভেন্ট ইনজেকশনগুলি ক্যাফেইন রিটেনশন টাইমে কোনও হস্তক্ষেপ দেখায়নি, যা নিশ্চিত করে যে ম্যাগনেসিয়াম অক্সাইড ক্লিন-আপ এবং ট্রাইক্লোরোঅ্যাসেটিক অ্যাসিড প্রোটিন অধঃক্ষেপণ ম্যাট্রিক্স উপাদানগুলিকে কার্যকরভাবে সরিয়ে দেয়। ছয়টি ধারাবাহিক ইনজেকশন স্থিতিশীল রিটেনশন টাইম এবং পিক এরিয়া দিয়েছে, চমৎকার যন্ত্রের নির্ভুলতা দেখিয়েছে, যখন উভয় ম্যাট্রিক্সে 94% এর বেশি পুনরুদ্ধার ন্যূনতম নমুনা ক্ষতি এবং একটি শক্তিশালী প্রস্তুতি পদ্ধতি প্রমাণ করেছে।

GB 5009.139-2014 অনুসরণ করে, ডায়োড অ্যারে ডিটেকশন সহ ওয়ানি LC3500 HPLC সিস্টেম পানীয়গুলিতে ক্যাফেইন নির্ধারণের জন্য একটি সম্পূর্ণ বৈধ ওয়ার্কফ্লো সরবরাহ করেছে। 10.0 থেকে 200.0 ug/mL পর্যন্ত 0.9999 এর বেশি r সহ লিনিয়ারিটি, 0.3% RSD এর নিচে পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা এবং 94% এর বেশি পুনরুদ্ধার নিশ্চিত করে যে পদ্ধতিটি কার্বনেটেড এবং দুধ-যুক্ত উভয় পণ্যের জন্য নির্ভুল, সুনির্দিষ্ট এবং পুনরুৎপাদনযোগ্য। 0.0446 মিলিগ্রাম/কেজি এবং 0.75 মিলিগ্রাম/কেজি এর সনাক্তকরণ সীমা সিস্টেমের কম শব্দ এবং উচ্চ সংবেদনশীলতা দেখায়, যা এটিকে পানীয় উৎপাদন এবং তৃতীয় পক্ষের পরীক্ষাগারগুলিতে রুটিন মান নিয়ন্ত্রণ, লেবেল যাচাইকরণ এবং নিয়ন্ত্রক সম্মতি পরীক্ষার জন্য উপযুক্ত করে তোলে।

• 272 nm এ ডায়োড অ্যারে ডিটেকশন রঙিন এবং ঘোলাটে ম্যাট্রিক্সে ক্যাফিনের নির্বাচনী, কম-শব্দ পরিমাণের জন্য সরবরাহ করে।
• C18 কলামে একটি সাধারণ মিথানল এবং জল মোবাইল ফেজ পরীক্ষাগারগুলির মধ্যে পদ্ধতির স্থানান্তর দ্রুত এবং সস্তা রাখে।
• ম্যাট্রিক্স-নির্দিষ্ট ক্লিন-আপ, কার্বনেটেড পানীয়ের জন্য ম্যাগনেসিয়াম অক্সাইড এবং দুধ-ভিত্তিক পানীয়ের জন্য ট্রাইক্লোরোঅ্যাসেটিক অ্যাসিড, কলামটিকে রক্ষা করে এবং এর পরিষেবা জীবন বাড়ায়।
• স্থিতিশীল রিটেনশন টাইম এবং প্রতিসম পিকগুলি উচ্চ-থ্রুপুট QC পরীক্ষাগারগুলিতে পুনরায় ইনজেকশন এবং পুনরাবৃত্তিমূলক কাজ হ্রাস করে।