তরল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা প্রোপ্রানোলল হাইড্রোক্লোরাইড ট্যাবলেটগুলিতে নাইট্রোসামিন অমেধ্যগুলির নির্ধারণ

কীওয়ার্ড: প্রোপানোলল, উচ্চ কর্মক্ষমতা সম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফি, নাইট্রোসামিন অপরিষ্কারতা

১. যন্ত্র ও বিকারক​

১.১ এইচপিএলসি সিস্টেমের কনফিগারেশন তালিকা

১.২ বিকারক এবং স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ

সারণী ২ বিকারক এবং স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ

১.৩ পরীক্ষার উপকরণ এবং সহায়ক সরঞ্জাম

আলট্রাসনিক ক্লিনার

ভোর্টex মিক্সার

২. পরীক্ষার পদ্ধতি

২.১ দ্রবণ প্রস্তুতি

২.১.১ ২mol/L সোডিয়াম হাইড্রোক্সাইড দ্রবণ: ৪ গ্রাম সোডিয়াম হাইড্রোক্সাইড নিন, ৫০ মিলি পানিতে দ্রবীভূত করুন এবং ভালোভাবে মেশান।

২.১.২ অ্যাসিটোনাইট্রাইল-জল-সালফিউরিক অ্যাসিড (৫৫:৪৫:০.১) মিশ্রণ: ১.৬ গ্রাম সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট এবং ০.৩১ গ্রাম টেট্রাবুটাইল অ্যামোনিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেট নিন, ১ মিলি সালফিউরিক অ্যাসিড, 450 মিলি জল এবং 550 মিলি অ্যাসিটোনাইট্রাইল যোগ করুন। ২ mol/L সোডিয়াম হাইড্রোক্সাইড দ্রবণ দিয়ে pH 3.3 এ সমন্বয় করুন এবং ভালোভাবে মেশান।

২.১.৩ দ্রাবক: মোবাইল ফেজের মতো।

২.১.৪ লিনিয়ার দ্রবণ: যথাযথ পরিমাণে N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড সঠিকভাবে ওজন করুন, মোবাইল ফেজের সাথে দ্রবীভূত করুন এবং পাতলা করুন যাতে প্রায় 200ng প্রতি 1mL দ্রবণ পাওয়া যায় যা স্ট্যান্ডার্ড স্টক দ্রবণ হিসাবে ব্যবহৃত হবে। তারপর স্টক দ্রবণের উপযুক্ত পরিমাণ ছয়টি 100mL আয়তনমিতিক ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন, মোবাইল ফেজ দিয়ে চিহ্নের দিকে পাতলা করুন এবং 0.8ng/mL, 1ng/mL, 2ng/mL, 3ng/mL, 4ng/mL, এবং 6ng/mL ঘনত্ব সহ একটি স্ট্যান্ডার্ড সিরিজের কার্যকরী বক্ররেখা প্রস্তুত করতে ভালোভাবে মেশান।

২.১.৫ রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ: যথাযথ পরিমাণে N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড সঠিকভাবে ওজন করুন, মোবাইল ফেজের সাথে দ্রবীভূত করুন এবং পাতলা করুন যাতে প্রায় 2ng N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল প্রতি 1mL দ্রবণ পাওয়া যায় যা রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ হিসাবে ব্যবহৃত হবে।

২.২ নমুনা প্রস্তুতি

২.২.১ নমুনা দ্রবণ: যথাযথ পরিমাণে সূক্ষ্মভাবে গুঁড়ো করা প্রোপানোলল হাইড্রোক্লোরাইড ট্যাবলেট সঠিকভাবে ওজন করুন, মোবাইল ফেজের সাথে দ্রবীভূত করুন এবং পাতলা করুন যাতে প্রায় 0.27mg প্রোপানোলল প্রতি 1mL দ্রবণ পাওয়া যায় যা নমুনা দ্রবণ হিসাবে ব্যবহৃত হবে।

২.২.২ নির্ভুলতা দ্রবণ: প্রায় ২৯৭ মিলিগ্রাম সূক্ষ্মভাবে গুঁড়ো করা প্রোপানোলল হাইড্রোক্লোরাইড ট্যাবলেট একটি 100mL আয়তনমিতিক ফ্লাস্কে সঠিকভাবে ওজন করুন। উপযুক্ত পরিমাণে N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ যোগ করুন, দ্রবীভূত করুন এবং চিহ্নের দিকে পাতলা করুন যাতে 100% স্পাইক করা নমুনা প্রস্তুত করা যায়। নির্ভুলতা দ্রবণ পেতে ভালোভাবে মেশান।

৩. পরীক্ষার ফলাফল

৩.১ বৈশিষ্ট্যতা

চিত্র ২ বৈশিষ্ট্যতার ক্রোমাটোগ্রাম

নোট: দ্রাবক N-নাইট্রোসো-প্রোপানোললের সনাক্তকরণে হস্তক্ষেপ করে না এবং পরীক্ষার দ্রবণে অন্যান্য অমেধ্যের ক্রোমাটোগ্রাফিক শিখরগুলিও N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল অমেধ্যের নির্ধারণে হস্তক্ষেপ করে না।

৩.২ লিনিয়ার পরীক্ষা

চিত্র ৩ N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল অমেধ্যের স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা

নোট: পরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি দেখায় যে N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল অমেধ্য পরীক্ষার বক্ররেখার পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ (R) 0.999 এর বেশি, যা পরীক্ষার প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।

৩.৩ পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা পরীক্ষা

চিত্র ৪ ৬টি প্রতিলিপি ইনজেকশনের ক্রোমাটোগ্রাম ২ng/mL স্ট্যান্ডার্ডের জন্য

সারণী ৩ ৬টি প্রতিলিপি ইনজেকশনের ডেটা ২ng/mL স্ট্যান্ডার্ডের জন্য

নোট: উপরের সারণীতে দেখানো হয়েছে, N-নাইট্রোসো-প্রোপানোললের ধারণ সময়ের পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা ০.০৪৩%, এবং শিখর এলাকার পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা ০.৪৬৪%, যা ভালো পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা নির্দেশ করে।

৩.৪ নির্ভুলতা পরীক্ষা

চিত্র ৫ ট্যাবলেটে N-নাইট্রোসো-প্রোপানোললের ওভারলেড নির্ভুলতা ক্রোমাটোগ্রাম

সারণী ৪ প্রোপানোলল হাইড্রোক্লোরাইড ট্যাবলেটগুলির নির্ভুলতা (N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল)

নোট: ছয়টি নমুনায় N-নাইট্রোসো-প্রোপানোললের পুনরুদ্ধার ৯৬.৯৮% থেকে ১০৪.৭১% পর্যন্ত ছিল, যার গড় পুনরুদ্ধার ১০১.৩৮%। পদ্ধতিটি ভালো নির্ভুলতা এবং পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা দেখায়।

৩.৫ এলওডি পরীক্ষা

চিত্র ৬ ২ng/mL স্ট্যান্ডার্ড ঘনত্বের N-নাইট্রোসো-প্রোপানোললের পরীক্ষার ক্রোমাটোগ্রাম

সারণী ৫ ২ng/mL স্ট্যান্ডার্ড ঘনত্বের N-নাইট্রোসো-প্রোপানোললের রেফারেন্স পরীক্ষার ডেটা

নোট: উপরের সারণীতে ২ng/mL ঘনত্বের N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ডের পরীক্ষার ডেটার উপর ভিত্তি করে, N-নাইট্রোসো-প্রোপানোললের তাত্ত্বিক সনাক্তকরণ সীমা ৩:১ সংকেত-থেকে-শব্দ অনুপাত ব্যবহার করে ০.১৫১ng/mL হিসাবে গণনা করা হয়।

৩.৬ একটি ব্র্যান্ড ট্যাবলেটের পরীক্ষা

চিত্র ৭ একটি ব্র্যান্ড ট্যাবলেটের পরীক্ষার ক্রোমাটোগ্রাম

নোট: ব্র্যান্ড ট্যাবলেটগুলিতে N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল সনাক্ত করা যায়নি।

৪. উপসংহার

নাইট্রোসামিন অমেধ্য N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল নিয়ে একটি গবেষণা করা হয়েছিল প্রোপানোলল হাইড্রোক্লোরাইড ট্যাবলেটগুলিতে, যা নাইট্রোসামিন ড্রাগ সাবস্ট্যান্স-সম্পর্কিত অমেধ্যগুলির (NDSRI) জন্য গ্রহণযোগ্য গ্রহণের মাত্রা স্থাপনের বিষয়ে FDA-এর সম্প্রতি প্রকাশিত নির্দেশিকা নথির সাথে সঙ্গতিপূর্ণ। এই নথি অনুসারে, AI (গ্রহণযোগ্য গ্রহণ) মানটি 1500ng/day হিসাবে গণনা করা হয়। এই পণ্যের সর্বাধিক দৈনিক ডোজ (200mg) বিবেচনা করে, ট্যাবলেটগুলিতে নিয়ন্ত্রণ সীমা 7.5ppm এর বেশি হবে না। পদ্ধতি যাচাইকরণ একটি UV ডিটেক্টর দিয়ে সজ্জিত Wayeal-এর উচ্চ-কর্মক্ষমতা সম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) সিরিজ ব্যবহার করে করা হয়েছিল। ট্যাবলেট নমুনাগুলি যাচাইকৃত সনাক্তকরণ পদ্ধতি ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং কোনো নাইট্রোসামিন অমেধ্য N-নাইট্রোসো-প্রোপানোলল সনাক্ত করা যায়নি। উপরের সমস্ত ডেটা যন্ত্রপাতির জন্য ফার্মাকোপিয়াল প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।