ওয়ায়েয়ালের উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফি দ্বারা ফিডের মধ্যে মেথিয়োনিন হাইড্রক্সাই অ্যানালগ নির্ধারণ

মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগ (এমএইচএ) একটি জৈবিক অ্যাসিড অ্যাডিটিভ যা মিথিয়োনিনের বিকল্প হিসাবে খাদ্য শিল্পে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। এমএইচএ ব্যাপকভাবে হাঁস-মুরগির খাদ্য (ব্রয়লার এবং স্তর) তে ব্যবহৃত হয়,শূকর (শূকর এবং শেষ শূকর)এটি মিথিয়োনিনের প্রতিস্থাপন হিসাবে খাদ্য খরচ কমাতে উল্লেখযোগ্য প্রভাব দেখায়।পশুদের অন্ত্রের পরিবেশের উন্নতি, এবং পশুদের অনাক্রম্যতা বাড়ায়।

ইউভি সনাক্তকরণের সাথে যুক্ত উচ্চ-কার্যকারিতা তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফি বিভিন্ন জটিল ফিড নমুনার বিশ্লেষণের জন্য উপযুক্ত, কারণ এটির চমৎকার বিচ্ছেদ দক্ষতা,শক্তিশালী ম্যাট্রিক্স হস্তক্ষেপ প্রতিরোধের, উচ্চ সনাক্তকরণ সংবেদনশীলতা, এবং স্থিতিশীল এবং নির্ভরযোগ্য পরিমাণগত ফলাফল।এই পরীক্ষাটি স্ট্যান্ডার্ড "হাই পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোম্যাটোগ্রাফি দ্বারা ফিডের মধ্যে মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগ নির্ধারণ" (GB/T 19371-2025) অনুযায়ী পরিচালিত হয়েছিল. A Wayeal LC3400 series high performance liquid chromatograph equipped with a UV detector was employed to validate the sample pretreatment procedure and the liquid chromatographic separation and detection system, যা বিভিন্ন ধরণের ফিড নমুনায় মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগের গুণগত সনাক্তকরণ এবং সুনির্দিষ্ট পরিমাণগত বিশ্লেষণ উভয়ই সক্ষম করে।

কীওয়ার্ডঃ ফিড; মেথিয়নিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগ; উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফি।

1. যন্ত্রপাতি এবং রিএজেন্টস

1.১ এইচপিএলসি কনফিগারেশন তালিকা

টেবিল ১ উচ্চ পারফরম্যান্স তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফি সিস্টেমের কনফিগারেশন তালিকা

1.২ রিএজেন্ট এবং রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ডের তালিকা

টেবিল ২ রিএজেন্ট এবং রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড তালিকা

1.3 তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফির শর্তাবলী

টেবিল ৩ উচ্চ পারফরম্যান্স তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফি শর্তাবলী

1.4 পরীক্ষামূলক উপকরণ এবং সহায়ক সরঞ্জাম

আল্ট্রাসোনিক ক্লিনার;

ভর্টেক্স মিক্সার;

উচ্চ গতির সেন্ট্রিফুগ;

বিশ্লেষণগত ভারসাম্য;

শেকার।

2পরীক্ষার পদ্ধতি

2.১ দ্রবণ প্রস্তুতি

2.1.১ স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ সলিউশনঃ

মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগ রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ডের একটি উপযুক্ত পরিমাণ সঠিকভাবে ওজন করুন এবং এটি 10 শতাংশ অ্যাসেটোনাইট্রিলের মধ্যে দ্রবীভূত করুন 0 এর ভর ঘনত্বের সাথে স্ট্যান্ডার্ড সমাধানগুলির একটি সিরিজ প্রস্তুত করতে।5১.0, ২.0, ৫.0, ১০.0, ২০.0৪০।0, এবং ৮০।0μ৫ মিলিলিটার স্ট্যান্ডার্ড সলিউশন আলাদাভাবে ১৫ মিলিলিটার টপযুক্ত টেস্ট টিউবগুলিতে স্থানান্তর করুন। ৫০% পটাসিয়াম হাইড্রক্সাইড সলিউশনের ০.১ মিলিলিটার সঠিকভাবে যোগ করুন এবং ১৫ সেকেন্ডের জন্য ঘূর্ণি করুন।তারপর সঠিকভাবে 0 যোগ করুন।.২.২ এমএল ৫০% ফসফরিক অ্যাসিড সলিউশন, এবং আরও ১৫ সেকেন্ডের জন্য ঘূর্ণায়মান। ৮০০০r/মিনিট এ ৫ মিনিট ধরে সেন্ট্রিফুগ করুন। বিশ্লেষণের আগে একটি মাইক্রোপোরাস ঝিল্লি ফিল্টার দিয়ে সুপারনেটেন্ট পাস করুন।

2.1.২ পরীক্ষার নমুনা সমাধানঃ

একটি পাত্রে 5g ফিড নমুনা ওজন করুন, 10% অ্যাসেটোনাইট্রিল সমাধানের 50mL যোগ করুন এবং 30s জন্য মিশ্রিত করুন। একটি শেকারে রাখুন এবং 30 মিনিটের জন্য ঝাঁকুনি দিন। 5000r / মিনিট এ 5 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফুগ করুন।এবং পরে ব্যবহারের জন্য supernatant রাখা. উপরে supernatant একটি 15mL বন্ধ টেস্ট টিউব মধ্যে সঠিকভাবে স্থানান্তর 5mL. সঠিকভাবে 0.1mL যোগ 50% পটাসিয়াম হাইড্রক্সাইড সমাধান এবং 15s জন্য ঘূর্ণি যোগ করুন। তারপর সঠিকভাবে যোগ 0.50% ফসফরিক অ্যাসিড সলিউশনের 2 মিলিগ্রাম এবং আরও 15 সেকেন্ডের জন্য ঘূর্ণি. ৮০০০r/min এ ৫ মিনিট ধরে সেন্ট্রিফুগ করুন। বিশ্লেষণের আগে একটি মাইক্রোপোরাস ঝিল্লি ফিল্টার দিয়ে সুপারনেটেন্টটি পাস করুন। দুটি সমান্তরাল পরীক্ষার নমুনা সমাধান প্রস্তুত করুন।

2.1.৩ পুনরুদ্ধার পরীক্ষার সমাধানঃ

নমুনা সুপারন্যাটেন্টের ২.৫ এমএল এবং প্রতিটি স্ট্যান্ডার্ড সিরিজের সমাধানের ২.৫ এমএল একটি ১৫ এমএল বন্ধ টেস্ট টিউবটিতে সঠিকভাবে স্থানান্তর করুন। সঠিকভাবে ০ যোগ করুন।পটাসিয়াম হাইড্রক্সাইডের ৫০% সলিউশন এবং ১৫ সেকেন্ডের জন্য ভর্টেক্সের ১ মিলি. তারপর সঠিকভাবে যোগ 0.2mL 50% ফসফরিক অ্যাসিড সমাধান এবং ঘূর্ণি জন্য অন্য 15s. 5 মিনিট 8000r / মিনিট এ centrifuge.বিশ্লেষণের আগে একটি মাইক্রোপোরাস ঝিল্লি ফিল্টার মাধ্যমে supernatant পাস.

3পরীক্ষার ফলাফল

3.১ রৈখিকতা এবং পরিসীমা

টেবিল ৪ স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ কনসেন্ট্রেশন টেবিল

চিত্র ১ মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগের স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ

দ্রষ্টব্যঃ মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগ রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড সলিউশনের যথাযথ পরিমাণ নেওয়া হয়েছিল এবং স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা প্রস্তুত করার জন্য ধারাবাহিকভাবে ঘনত্বের একটি সিরিজ পর্যন্ত দ্রবীভূত করা হয়েছিল।রৈখিক পরিসীমা ছিল ০.5🙏80.0μg/mL, এবং সংশ্লেষন সহগ (R) ছিল ০।99983, যা বিশ্লেষকের জন্য চমৎকার রৈখিকতা নির্দেশ করে।

3.২ সঠিকতা

চিত্র ২ রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ডের জন্য সুনির্দিষ্ট পরীক্ষার ওভারলেড ক্রোম্যাটোগ্রাম (20.0μg/mL)

টেবিল ৫ রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ডের জন্য নির্ভুলতা পরীক্ষার তথ্য (20.0μg/mL)

দ্রষ্টব্যঃ মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগের রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড (একটি ঘনত্ব 20.0μরিটেনশন টাইমের পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা (আরএসডি) ০.০৮৪% এবং পিক এলাকার ০.৩৯১% ছিল, যা ভাল যন্ত্রের নির্ভুলতা নির্দেশ করে।

3.৩ পুনরুদ্ধার

চিত্র 3 ফিডের মধ্যে মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগের জন্য পুনরুদ্ধার পরীক্ষার উপর ভিত্তি করে ক্রোম্যাটোগ্রাম

টেবিল ৬ ফিডের মধ্যে মেথিয়োনিন হাইড্রক্সাই অ্যানালগের জন্য পুনরুদ্ধারের পরীক্ষার তথ্য

দ্রষ্টব্যঃ নমুনাটি রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ডের সাথে 40 এর ঘনত্বের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল।0μগ/মিলিটার এবং উপরে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসরণ করে বিশ্লেষণ করা হয়। প্রাপ্ত পুনরুদ্ধার 88.56% ছিল, যা পদ্ধতির ভাল নির্ভুলতা নির্দেশ করে।

3.4 সনাক্তকরণের সীমা (এলওডি)

চিত্র ৪ মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগ স্ট্যান্ডার্ডের ক্রোম্যাটোগ্রাম (২)5μ(জি/এমএল)

টেবিল ৭ মেথিয়নিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগ রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ডের জন্য পরীক্ষার তথ্য (২) ।5μ(জি/এমএল)

দ্রষ্টব্যঃ উপরের টেবিলে প্রদর্শিত মেথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগ রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ডের পরীক্ষার তথ্যের উপর ভিত্তি করে, তত্ত্বগত সনাক্তকরণের সীমা (এলওডি) 0 হিসাবে গণনা করা হয়েছিল।033μg/mL একটি সংকেত-শব্দ অনুপাত 3 (S/N = 3) এ.

3.5 একটি ফিড নমুনার পরীক্ষা

চিত্র 5 একটি ফিড নমুনার ক্রোম্যাটোগ্রাম

দ্রষ্টব্যঃ মিথিয়োনিন হাইড্রোক্সি অ্যানালগ একটি ফুড নমুনায় 0 এর ঘনত্বের মধ্যে সনাক্ত করা হয়েছিল।402μজি/এমএল।

4উপসংহার

এই পরীক্ষাটি "হাই পারফরম্যান্স তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফি দ্বারা ফিডের মধ্যে মেথিয়োনিন হাইড্রক্সাই অ্যানালগ নির্ধারণ" (GB/T 19371-2025) মান অনুযায়ী পরিচালিত হয়েছিল,ইউভি ডিটেক্টর দিয়ে সজ্জিত Wayeal LC3400 সিরিজের উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফ ব্যবহার করেপরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে লক্ষ্যমাত্রা পিকটি ভাল সমতুল্যতা এবং উচ্চ তত্ত্বগত প্লেট সংখ্যা প্রদর্শন করে। 0 এর ঘনত্বের পরিসরে।5🙏80.0μg/mL, সংশ্লিষ্টতা সহগ (R) 0 এর উপরে ছিল।9998. এমএইচএ রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ডের রিটেনশন টাইম এবং পিক এলাকার জন্য আরএসডি মান (20.0μমেশিনের মধ্যে এমএইচএ-র পুনরুদ্ধার ৪০ শতাংশে পৌঁছেছে।0μএমএইচএ-র জন্য তত্ত্বগত সনাক্তকরণের সীমা (এলওডি) নির্ধারিত হয়েছিল ০।033μএমএইচএ সফলভাবে 0 এর ঘনত্বের সাথে একটি ফিড নমুনায় সনাক্ত করা হয়েছিল।402μউপরের সমস্ত তথ্য ফার্মাকোপয়েয়া পদ্ধতির প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।