ওয়েয়াল এলসিএমএস-টিকিউ৯২০০ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-মাস স্পেকট্রোমেট্রি সিস্টেম ব্যবহার করে অ্যান্টিবায়োটিক গাঁজনার অবশিষ্টাংশে এরিথ্রোমাইসিন অবশিষ্টাংশের নির্ধারণ

এরিথ্রোমাইসিন হল একটি ম্যাক্রোলাইড অ্যান্টিবায়োটিক যা স্ট্রেপ্টোমাইসিস এরিথ্রিয়াসের গাঁজন দ্বারা উত্পাদিত হয়। এটি ব্যাকটেরিয়া প্রোটিন সংশ্লেষণকে বাধা দিয়ে প্রাথমিকভাবে তার ব্যাকটেরিয়ারোধী প্রভাব প্রয়োগ করে। ইরিথ্রোমাইসিন উৎপাদন প্রাথমিকভাবে জৈব-গাঁজন প্রযুক্তির উপর নির্ভর করে, যার মধ্যে রয়েছে স্ট্রেন নির্বাচন, বীজ চাষ, ট্যাঙ্কে বড় আকারের গাঁজন, নিষ্কাশন এবং পরিশোধন। গাঁজন করার পর, এরিথ্রোমাইসিন জৈব দ্রাবক (যেমন বিউটাইল অ্যাসিটেট) দিয়ে বের করা হয়, তারপরে ক্রিস্টালাইজেশন বা আয়ন-বিনিময় রজন বিভাজনের মাধ্যমে পরিশোধন করা হয়, শেষ পর্যন্ত ক্লিনিকাল-গ্রেডের লবণ (যেমন, এরিথ্রোমাইসিন ইথিলসুকিনেট) পাওয়া যায়। যাইহোক, এরিথ্রোমাইসিন উৎপাদন প্রক্রিয়া উল্লেখযোগ্য পরিমাণে মাইসেলিয়াল ড্রেগ (গাঁজন অবশিষ্টাংশ) তৈরি করে, যেটিতে অবশিষ্ট অ্যান্টিবায়োটিক, মাইক্রোবিয়াল প্রোটিন এবং বিপাকীয় উপজাতগুলি থাকতে পারে। সঠিকভাবে পরিচালিত না হলে, এই অবশিষ্টাংশগুলি পরিবেশগত স্রাবের মাধ্যমে পরিবেশগত শৃঙ্খলে প্রবেশ করতে পারে বা খাদ্য সংযোজন হিসাবে ব্যবহার করতে পারে, যা একাধিক বিপদের দিকে পরিচালিত করে: অবশিষ্ট ইরিথ্রোমাইসিন মাটি এবং জলাশয়ে অ্যান্টিবায়োটিক প্রতিরোধী জিনের বিস্তারকে উন্নীত করতে পারে, জীবাণু সম্প্রদায়ের ভারসাম্যকে ব্যাহত করে; খাদ্য শৃঙ্খলের মাধ্যমে প্রসারিত, এটি প্রাণী বা মানুষের মধ্যে প্রতিরোধী ব্যাকটেরিয়া স্ট্রেনের উত্থান ঘটাতে পারে, যা অ্যান্টিবায়োটিকের কার্যকারিতা হ্রাস করে; উপরন্তু, অবশিষ্টাংশের মধ্যে অব্যবহৃত জৈব পদার্থ পরিবেশ দূষণের কারণ হতে পারে। অতএব, এরিথ্রোমাইসিন উৎপাদন থেকে দূষণ নিয়ন্ত্রণের জন্য মাইসেলিয়াল অবশিষ্টাংশের কঠোর নিয়ন্ত্রণ একটি গুরুত্বপূর্ণ পরিমাপ।

এই পরীক্ষাটি স্ট্যান্ডার্ড "T/PIAC 00003—2021 গ্রুপ স্ট্যান্ডার্ড অফ চায়না ফার্মাসিউটিক্যাল ইন্ডাস্ট্রি অ্যাসোসিয়েশন - অ্যান্টিবায়োটিক অবশিষ্টাংশ, জৈব সার বেস উপাদান, ফসল, এবং পরিবেশগত মিডিয়াতে এরিথ্রোমাইসিন নির্ধারণের পদ্ধতি" এর রেফারেন্সে পরিচালিত হয়েছিল, যা Wayeal LCMS-2021-2021 স্পেক্ট্রোগ্রাফি ব্যবহার করে। মাইসেলিয়াল ড্রেসে এরিথ্রোমাইসিন সামগ্রী নির্ধারণ করার সিস্টেম। পরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে সিস্টেমের উপযুক্ততা পরীক্ষা পরীক্ষামূলক প্রয়োজনীয়তাগুলি পূরণ করে ভাল শিখর আকৃতি এবং ভাল রৈখিকতা প্রদর্শন করেছে।

1. যন্ত্র এবং বিকারক

1.1 LCMS এর কনফিগারেশন তালিকা

সারণি 1 উপকরণ কনফিগারেশনের তালিকা

1.2 বিকারক এবং মান

সারণি 2 বিকারক এবং মান তালিকা

1.3 পরীক্ষার উপাদান এবং সহায়ক সরঞ্জাম

অতিস্বনক ক্লিনার

ঘূর্ণি মিশুক

উচ্চ গতির সেন্ট্রিফিউজ

2. পরীক্ষা পদ্ধতি

2.1 নমুনা প্রিট্রিটমেন্ট

নমুনার ওজন 0.5 গ্রাম (সঠিক থেকে 0.001 গ্রাম) একটি গ্লাস-স্টপারড টেস্ট টিউবে। 50mL acetonitrile যোগ করুন, মিশ্রণটিকে একজাত করতে 1 মিনিটের জন্য ঘূর্ণি দিন এবং 20 মিনিটের জন্য অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন সঞ্চালন করুন। তারপর মিশ্রণটিকে 50mL সেন্ট্রিফিউজ টিউবে স্থানান্তর করুন এবং 4000rpm-এ 10 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন। সুপারনাট্যান্টের একটি উপযুক্ত পরিমাণ সংগ্রহ করুন এবং এটি একটি 0.22μm ফিল্টার ঝিল্লির মাধ্যমে পাস করুন। প্রাথমিক ফিল্ট্রেটের অন্তত 1mL ফেলে দিন, তারপর বিশ্লেষণের জন্য অবশিষ্ট ফিল্ট্রেটকে অ্যাম্বার এলসি শিশিতে স্থানান্তর করুন।

2.2 পরীক্ষার শর্তাবলী

2.2.1 তরল ক্রোমাটোগ্রাফি পদ্ধতি শর্তাবলী

ক্রোমাটোগ্রাফি কলাম: C18 1.7μm 2.1x50mm

মোবাইল ফেজ: A: অ্যাসিটোনিট্রিল, B: 0.1% পানিতে ফর্মিক অ্যাসিড

প্রবাহের হার: 0.3mL/মিনিট

কলাম তাপমাত্রা: 30 ℃

ইনজেকশন ভলিউম: 2μL

2.2.2 ভর স্পেকট্রোমিটার পদ্ধতি শর্তাবলী

সারণি 3 ভর স্পেকট্রোমেট্রি আয়ন উত্স পরামিতি

3. পরীক্ষার ফলাফল

3.1 সিস্টেম উপযুক্ততা পরীক্ষা

সিস্টেমের উপযুক্ততা পরীক্ষার ফলাফলগুলি বহিরাগত শিখরগুলির হস্তক্ষেপ ছাড়াই ভালভাবে সংজ্ঞায়িত লক্ষ্য শিখরগুলি দেখিয়েছে, সমস্ত পরীক্ষামূলক প্রয়োজনীয়তা পূরণ করেছে।

চিত্র 1 এরিথ্রোমাইসিনের ক্রোমাটোগ্রাম একটি স্ট্যান্ডার্ড কার্যকরী সমাধান (0.5ng/mL)

3.2 লিনিয়ার রেঞ্জ

এরিথ্রোমাইসিন A-এর ক্রমাঙ্কন বক্ররেখাটি মধ্যবর্তী ঘনত্বের কার্যকরী সমাধান ব্যবহার করে স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণকে ধারাবাহিকভাবে পাতলা করে প্রস্তুত করা হয়েছিল। বক্ররেখাটি 0.5-500ng/mL পরিসর জুড়ে চমৎকার রৈখিকতা প্রদর্শন করেছে, একটি পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ (R²) 0.99-এর বেশি।

সারণি 4 এরিথ্রোমাইসিন A এর লিনিয়ার রেঞ্জ

চিত্র 2 এরিথ্রোমাইসিন A-এর জন্য ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা

3.3 সনাক্তকরণের সীমা (LOD) এবং পরিমাণ নির্ধারণের সীমা (LOQ)

এই পদ্ধতিতে, এরিথ্রোমাইসিন এ স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণের জন্য সনাক্তকরণের সীমা (LOD) এবং পরিমাণ নির্ধারণের সীমা (LOQ) যথাক্রমে 0.2ng/mL এবং 0.5ng/mL নির্ধারণ করা হয়েছিল। সংশ্লিষ্ট সংকেত-থেকে-শব্দ অনুপাত (S/N) ছিল 110.02 এবং 292.20, যথেষ্ট পরিমাণে 3 এবং 10-এর ন্যূনতম প্রয়োজনীয়তা অতিক্রম করেছে, যার ফলে পরীক্ষামূলক সংবেদনশীলতার মানদণ্ড পূরণ হয়েছে৷

চিত্র 3. এরিথ্রোমাইসিন A এর LOD এবং LOQ এর জন্য নিষ্কাশিত আয়ন ক্রোমাটোগ্রাম

3.4 নির্ভুলতা পরীক্ষা

এরিথ্রোমাইসিন এ দ্রবণটি পরপর সাতবার ইনজেকশন করা হয়েছিল, যার ফলাফল নীচের চিত্রে দেখানো হয়েছে। এরিথ্রোমাইসিন A-এর ধারণ সময়ের বিচ্যুতি ছিল 0.19%, এবং সর্বোচ্চ এলাকার বিচ্যুতি ছিল 0.96%, উভয়ই পরীক্ষামূলক প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে 5% এর নিচে।

চিত্র 4. এরিথ্রোমাইসিন একটি নমুনার যথার্থ ক্রোমাটোগ্রাম (7 ইনজেকশন)

3.5 নমুনা পরীক্ষা

উপরে উল্লিখিত প্রিট্রিটমেন্ট পদ্ধতি অনুসরণ করে, কঠিন নমুনায় লক্ষ্য শিখর এলাকা ছিল 7.4E6। বাহ্যিক স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতির মাধ্যমে গণনা করে, নমুনা দ্রবণে এরিথ্রোমাইসিন A উপাদান 400 ng/mL হিসাবে নির্ধারিত হয়েছিল।

চিত্র 5 এরিথ্রোমাইসিনের ক্রোমাটোগ্রাম একটি নমুনা পরীক্ষা

4. উপসংহার

এই পদ্ধতিটি অ্যান্টিবায়োটিক গাঁজন অবশিষ্টাংশে এরিথ্রোমাইসিন A উপাদান নির্ধারণের জন্য Wayeal LCMS-TQ9200 তরল ক্রোমাটোগ্রাফি-ভর স্পেকট্রোমেট্রি সিস্টেম ব্যবহার করে। তথ্য নির্দেশ করে যে পদ্ধতিটি চমৎকার কর্মক্ষমতা প্রদর্শন করে: সমস্ত ক্রোমাটোগ্রাফিক শিখরগুলি লেজ ছাড়াই সর্বোত্তম আকৃতি প্রদর্শন করে এবং সংবেদনশীলতা পরীক্ষামূলক প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে। রৈখিক পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ (R²) 0.99 ছাড়িয়ে গেছে। পরপর সাতটি ইনজেকশন জুড়ে সমস্ত যৌগের জন্য ধরে রাখার সময় এবং সর্বোচ্চ এলাকা বিচ্যুতি 1% এর মধ্যে, যা উচ্চ নির্ভুলতা নির্দেশ করে। নমুনা ক্রোমাটোগ্রামগুলি বহিরাগত শিখর থেকে কোনও হস্তক্ষেপ দেখায় না এবং পরিমাপ করা নমুনার বিষয়বস্তু হল 400ng/mL। Wayeal LC-MS/MS সিস্টেমের সাথে সজ্জিত এই পদ্ধতিটি পরীক্ষার নমুনার রুটিন গুণগত এবং পরিমাণগত বিশ্লেষণের প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।