ওয়েয়াল এলসিএমএস-টিকিউ৯২০০ ব্যবহার করে মুরগির মাংসে অ্যাম্ফেনিকল অ্যান্টিবায়োটিকের অবশিষ্টাংশ নির্ধারণ

কীওয়ার্ড: LCMS, অ্যাম্ফেনিকল, খাদ্য নিরাপত্তা, পশুচিকিৎসা ওষুধের অবশিষ্টাংশ।

১. যন্ত্র ও বিকারক

১.১ LCMS-এর কনফিগারেশন তালিকা

সারণী ১ যন্ত্র কনফিগারেশন তালিকা

১.৩ পরীক্ষার উপকরণ এবং সহায়ক সরঞ্জাম

আলট্রাসনিক ক্লিনার

ভর্টেক্স মিক্সার

জল স্নান নাইট্রোজেন বাষ্পীভবনকারী

হাই-স্পিড সেন্ট্রিফিউজ

২. পরীক্ষার পদ্ধতি

২.১ দ্রবণ প্রস্তুতি

২.১.১ ২% অ্যামোনিয়েটেড ইথাইল অ্যাসিটেট দ্রবণ: ৪ মিলি অ্যামোনিয়া জল নিন এবং ইথাইল অ্যাসিটেট দিয়ে ২০০ মিলি পর্যন্ত মিশ্রিত করুন।

২.১.২ ৪% সোডিয়াম ক্লোরাইড দ্রবণ: ৪ গ্রাম সোডিয়াম ক্লোরাইড নিন, জলে দ্রবীভূত করুন এবং ১০০ মিলি পর্যন্ত মিশ্রিত করুন।

২.১.৩ ৪% সোডিয়াম ক্লোরাইড-স্যাচুরেটেড n-হেক্সেন দ্রবণ: উপযুক্ত পরিমাণে ৪% সোডিয়াম ক্লোরাইড দ্রবণ নিন, অতিরিক্ত n-হেক্সেন যোগ করুন, মেশান, স্তর পৃথকীকরণের জন্য রেখে দিন এবং উপরের n-হেক্সেন স্তরটি নিন।

২.১.৪ মিশ্র অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড কার্যকরী দ্রবণ: মিশ্র অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড স্টক দ্রবণের উপযুক্ত পরিমাণ নিন, ক্লোরামফেনিকল-ডি5 ১০ng/mL এবং অন্যান্য অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড (ফ্লোরফেনিকল-ডি3, থিয়ামফেনিকল-ডি3, এবং ফ্লোরফেনিকল অ্যামিন-ডি3) প্রতিটি ৫০ng/mL পেতে ২০% মিথানল দিয়ে মিশ্রিত করুন।

২.২ নমুনা প্রি ট্রিটমেন্ট

২.২.১ নমুনা নিষ্কাশন: ২ গ্রাম নমুনা ওজন করুন (±০.০১ গ্রাম পর্যন্ত নির্ভুল), ১০০µL মিশ্র অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড কার্যকরী দ্রবণ যোগ করুন, ১ মিনিটের জন্য ঝাঁকান, ১০ মিলি ২% অ্যামোনিয়েটেড ইথাইল অ্যাসিটেট দ্রবণ যোগ করুন, ১০ মিনিটের জন্য ঝাঁকান, ৮০০০rpm-এ ৫ মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং উপরিভাগ সংগ্রহ করুন। অবশিষ্টাংশে আরও ১০ মিলি ২% অ্যামোনিয়েটেড ইথাইল অ্যাসিটেট দ্রবণ যোগ করুন এবং নিষ্কাশন পদ্ধতিটি পুনরাবৃত্তি করুন। দুটি উপরিভাগ একত্রিত করুন, নাইট্রোজেনের প্রবাহের অধীনে ৫০°C তাপমাত্রায় শুকিয়ে নিন এবং ব্যবহারের জন্য সংরক্ষণ করুন।

২.২.২ নমুনা পরিশোধন: পরিশোধন অবশিষ্টাংশে ৩ মিলি ৪% সোডিয়াম ক্লোরাইড দ্রবণ যোগ করুন, দ্রবীভূত করার জন্য ঝাঁকান, তারপর ৫ মিলি ৪% সোডিয়াম ক্লোরাইড-স্যাচুরেটেড n-হেক্সেন দ্রবণ যোগ করুন, ৩০ সেকেন্ডের জন্য ঝাঁকান, ৮০০০ rpm-এ ৫ মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং উপরের n-হেক্সেন স্তরটি ফেলে দিন। একবার ডি-গ্রিজিং পদ্ধতিটি পুনরাবৃত্তি করুন। ৫ মিলি ২% অ্যামোনিয়েটেড ইথাইল অ্যাসিটেট দ্রবণ যোগ করুন, ১০ মিনিটের জন্য ঝাঁকান, ৮০০০ rpm-এ ৫ মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং উপরিভাগ সংগ্রহ করুন। অবশিষ্টাংশে আরও ৫ মিলি ২% অ্যামোনিয়েটেড ইথাইল অ্যাসিটেট দ্রবণ যোগ করুন এবং নিষ্কাশন পদ্ধতিটি পুনরাবৃত্তি করুন। উপরিভাগ একত্রিত করুন, নাইট্রোজেনের প্রবাহের অধীনে ৫০°C তাপমাত্রায় শুকিয়ে নিন, ১ মিলি ২০% মিথানল দ্রবণ যোগ করুন, ৩০ সেকেন্ডের জন্য ঝাঁকান, একটি ঝিল্লির মাধ্যমে ফিল্টার করুন এবং যন্ত্র বিশ্লেষণের জন্য অপেক্ষা করুন।

২.৩ পরীক্ষার শর্তাবলী

২.৩.১ তরল ক্রোমাটোগ্রাফি শর্তাবলী

ক্রোমাটোগ্রাফি কলাম: C18 1.7μm 2.1x50mm

mobile phase: A: এসিটোনিট্রাইল; B: জলে ২ mM অ্যামোনিয়াম ফরম্যাট

প্রবাহের হার: ০.৩mL/min

কলামের তাপমাত্রা: ৪০ °C

ইনজেকশন ভলিউম: ৫µL

২.৩.২ ভর স্পেকট্রোমেট্রি শর্তাবলী

সারণী ৩ আয়ন উৎসের পরামিতি

৩. পরীক্ষার ফলাফল

৩.১ স্ট্যান্ডার্ড ক্রোমাটোগ্রাম

চারটি অ্যামাইড অ্যান্টিবায়োটিক এবং তাদের অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ডের নির্ধারণ ৬ মিনিটের মধ্যে সম্পন্ন হয়েছিল। সমস্ত চূড়াগুলি ভাল চূড়ার আকার দেখিয়েছিল এবং কোনো লেজ ছিল না, এবং প্রতিটি যৌগ সন্তোষজনক প্রতিক্রিয়া দেখিয়েছিল, যা পরীক্ষার প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।

চিত্র ১ ৪ অ্যাম্ফেনিকল অ্যান্টিবায়োটিক এবং অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ডের ক্রোমাটোগ্রাম (ক্লোরামফেনিকল ০.২ng/mL, অন্যান্য অ্যান্টিবায়োটিক ১ng/mL)

৩.২ লিনিয়ার রেঞ্জ

অ্যামাইড অ্যালকোহল মিশ্র স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণের একটি উপযুক্ত পরিমাণ নিন এবং একটি স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা প্রস্তুত করতে এটিকে ধাপে ধাপে বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে মিশ্রিত করুন। পরিমাণগত বিশ্লেষণের জন্য আইসোটোপ অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল। ক্লোরামফেনিকলের জন্য লিনিয়ার রেঞ্জ ছিল ০.২-১০ ng/mL এবং ফ্লোরফেনিকল অ্যামিন, থিয়ামফেনিকল এবং ফ্লোরফেনিকলের জন্য ১-৫০ ng/mL। লিনিয়ার সনাক্তকরণের ফলাফলের বিচ্যুতির পরিমাণ পরিচিত ঘনত্বের চেয়ে কম ছিল, R² মান ০.৯৯৫৮ থেকে ০.৯৯৯৮ পর্যন্ত ছিল, যা সমস্ত উপাদানের জন্য চমৎকার রৈখিকতা নির্দেশ করে।

সারণী ৪ যৌগগুলির লিনিয়ার রেঞ্জ

চিত্র ২ চারটি যৌগের ক্যালিব্রেশন কার্ভ ডেটা

৩.৩ LOD এবং LOQ

চীনা জাতীয় খাদ্য নিরাপত্তা স্ট্যান্ডার্ড GB 31658.20-2022 উল্লেখ করে যে এই পদ্ধতির জন্য, ক্লোরামফেনিকলের সনাক্তকরণের সীমা (LOD) হল ০.১µg/kg এবং পরিমাপের সীমা (LOQ) হল ০.২µg/kg; যেখানে থিয়ামফেনিকল, ফ্লোরফেনিকল এবং ফ্লোরফেনিকল অ্যামিনের জন্য, LOD হল ০.৫µg/kg এবং LOQ হল ১ µg/kg। সনাক্তকরণের সীমা (LOD) এবং পরিমাপের সীমা (LOQ)-এর নির্দিষ্ট ঘনত্বের সমস্ত লক্ষ্য যৌগের সংকেত-থেকে-শব্দ অনুপাত ৩ এবং ১০-এর চেয়ে উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি, যা জাতীয় মান-এ নির্দিষ্ট সংবেদনশীলতার প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।

সারণী ৫ প্রতিটি যৌগের সনাক্তকরণ এবং পরিমাপের সীমা

চিত্র ৩ চারটি যৌগের সনাক্তকরণ সীমা এবং পরিমাপ সীমাগুলির ক্রোমাটোগ্রাম

৩.৪ নির্ভুলতা পরীক্ষা

অ্যাম্ফেনিকল স্ট্যান্ডার্ড মিশ্রণ দ্রবণের কম, মাঝারি এবং উচ্চ ঘনত্ব নিন এবং ধারণের সময় এবং চূড়ার এলাকার বিচ্যুতি তুলনা করতে ছয়টি ধারাবাহিক ইনজেকশন করুন। ফলাফল নিচে টেবিলে দেখানো হয়েছে। সমস্ত অ্যাম্ফেনিকল যৌগের ধারণের সময়ের বিচ্যুতি ১%-এর কম ছিল এবং চূড়ার এলাকার বিচ্যুতি ৫%-এর কম ছিল, যা জাতীয় মান দ্বারা নির্দিষ্ট RSD ≤ ১৫% এর নির্ভুলতার প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।

সারণী ৬ প্রতিটি যৌগের জন্য নির্ভুলতা পরীক্ষা

চিত্র ৪ চারটি অ্যামাইড অ্যালকোহল যৌগের নির্ভুলতা ক্রোমাটোগ্রাম

৩.৫ ম্যাট্রিক্স স্পাইকিং রিকভারি পরীক্ষা

এই সনাক্তকরণ পদ্ধতির নির্ভুলতা একটি স্পাইক রিকভারি পরীক্ষা ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। প্রি ট্রিটমেন্টের জন্য বিভিন্ন অনুপাতে শূন্য ম্যাট্রিক্সের নমুনায় স্ট্যান্ডার্ড নমুনার পরিচিত ঘনত্ব যোগ করুন, উচ্চ, মাঝারি এবং নিম্ন ঘনত্বের ম্যাট্রিক্স-স্পাইকযুক্ত নমুনা প্রস্তুত করুন। স্পাইকযুক্ত নমুনাগুলির প্রতিটি ঘনত্বের স্তরটি স্বাধীনভাবে ছয়বার বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পদ্ধতির নির্ভুলতা মূল্যায়ন করে, স্পাইকিং-এর আগে এবং পরে ম্যাট্রিক্সে সনাক্তকৃত ঘনত্বের তুলনা করে রিকভারি হার গণনা করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি নিম্নরূপ দেখানো হয়েছে: মুরগির ম্যাট্রিক্সে, সমস্ত যৌগের স্পাইক রিকভারি হার ৯৪.৫% থেকে ১০৭.২% পর্যন্ত ছিল, CV ৫%-এর মধ্যে ছিল, যা নির্দেশ করে যে নির্ভুলতা পদ্ধতির প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।

সারণী ৬ স্পাইকযুক্ত মুরগির ম্যাট্রিক্সে যৌগগুলির রিকভারি হার

৩.৬ নমুনা পরীক্ষা

সুপারমার্কেট থেকে এলোমেলোভাবে কেনা মুরগির বুকের নমুনাগুলি পূর্বোক্ত নমুনা প্রি ট্রিটমেন্ট পদ্ধতি ব্যবহার করে নিষ্কাশন ও বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। যন্ত্রের উপর নমুনাগুলি পরীক্ষা করার পরে, চারটি অ্যামাইড অ্যান্টিবায়োটিকের কোনোটিই সনাক্ত করা যায়নি।

আপনার জিজ্ঞাসা সরাসরি আমাদের কাছে পাঠান