ওয়েয়েল এলসিএমএস-টিকিউ 9200 তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফি-ট্যান্ডেম ম্যাস স্পেকট্রোমেট্রি সিস্টেম ব্যবহার করে শূকর মাংসে β-Agonist অবশিষ্টাংশের নির্ধারণ

এই পরীক্ষাটি "জিবি 31658" এর উল্লেখ করে।22-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in porkপরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি দেখায় যে সিস্টেমের উপযুক্ততা পরীক্ষাটি পরীক্ষামূলক প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে ভাল আকৃতির পিক এবং ভাল রৈখিকতা প্রদর্শন করেছে।β- অ্যাজোনিস্ট স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কিং সলিউশনের জন্য রিটেনশন টাইম পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা 1% এর নিচে ছিল, এবং পিক এলাকার পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা 3% এরও কম ছিল, যা ভাল পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা নির্দেশ করে।.2ng/mL এবং 0.5ng/mL যথাক্রমে 3 এবং 10 এর চেয়ে উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল, যা পরীক্ষামূলক প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।

শূকর মাংসের নমুনা পরীক্ষায় কোন β-agonists সনাক্ত করা হয়নি। উপরের সমস্ত তথ্য স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতিতে নির্দিষ্ট যন্ত্রের প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে.

কীওয়ার্ডঃতরল ক্রোমাটোগ্রাফি-ট্যান্ডেম মাস স্পেকট্রোমেট্রি; β- অ্যাজোনিস্টস; ক্লেনবুটারল; খাদ্য নিরাপত্তা।

1যন্ত্রপাতি এবং রিএজেন্টস

1.1 এলসিএমএসের কনফিগারেশন তালিকা

টেবিল ১ যন্ত্রের কনফিগারেশনের তালিকা

1.২ রিএজেন্ট এবং স্ট্যান্ডার্ড

টেবিল ২ রিএজেন্ট এবং স্ট্যান্ডার্ডের তালিকা

1.৩ পরীক্ষামূলক উপকরণ এবং সহায়ক সরঞ্জাম

আল্ট্রাসোনিক ক্লিনার

ভর্টেক্স মিক্সার

ওয়াটার বাথ ধ্রুবক তাপমাত্রা শেকার

হাই-স্পিড সেন্ট্রিফুগ

2পরীক্ষার পদ্ধতি

2.1 নমুনা প্রাক চিকিত্সা

2.1.১ এনজাইম্যাটিক হাইড্রোলাইসিস এবং এক্সট্রাকশন

নমুনার 2g ( ± 0.05g সঠিকভাবে) একটি 50mL সেন্ট্রিফুগ টিউব মধ্যে ওজন করুন। 0.2mol / L অ্যামোনিয়াম অ্যাসিটেট বাফার সমাধান 6mL এবং β-glucuronidase / arylsulfatase 40μL যোগ করুন। পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করতে ভর্টিক্সএবং অন্ধকারে ৩৭ ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেট করুন এবং ১৬ ঘন্টা ধরে জল স্নানে ঝাঁকুনি দিন. পরবর্তী ব্যবহারের জন্য রুম তাপমাত্রায় ঠান্ডা হতে দিন।

2.1.২ নিষ্কাশন, বিশুদ্ধকরণ এবং ঘনত্ব

প্রস্তুত সমাধানটি নিন, 100 এনজি / এমএল অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কিং সলিউশনের 100μL যোগ করুন, পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করার জন্য ঘূর্ণি, এবং 8000r/min এ 8 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফুগ করুন। সুপারনেটেন্ট সংগ্রহ করুন, 0 এর 5mL যোগ করুন।১মোল/লিটার পারক্লোরিক এসিড সলিউশন, ঘূর্ণি মিশ্রিত করা, এবং পারক্লোরিক অ্যাসিড ব্যবহার করে পিএইচ 1.0 ± 0.2 এ সামঞ্জস্য করুন। 8000r/min এ 8 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফুগেশন করার পরে, 10 ± 0 এ সুপারনেটেন্টের পিএইচ সামঞ্জস্য করুন।5 ব্যবহার করে 10mol/L সোডিয়াম হাইড্রক্সাইড সমাধান. 15mL ইথাইল অ্যাসিটেট যোগ করুন, 5 মিনিটের জন্য মাঝারি গতিতে ঝাঁকুনি, এবং 5 মিনিটের জন্য 5000r / min এ centrifuge। উপরের জৈবিক স্তর সংগ্রহ করুন। অবশিষ্ট জলীয় স্তর,টার্ট-বুটাইল-মিথাইল ইথার ১০ মিলি যোগ করুন, মাঝারি গতিতে 5 মিনিটের জন্য ঝাঁকুনি, 5000r/min এ 5 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফুগ, এবং উপরের জৈব স্তর সংগ্রহ করুন। সমস্ত জৈব স্তরগুলি একত্রিত করুন এবং 50 °C এ নাইট্রোজেন প্রবাহের অধীনে শুকানোর জন্য বাষ্পীভূত করুন।৫ মিলিলিটারে ২% ফর্মিক অ্যাসিড সলিউশনে অবশিষ্ট দ্রবণ দ্রবীভূত করুন এবং একপাশে রাখুন. মিশ্র-মোড ক্যাটিয়ন এক্সচেঞ্জ সলিড-ফেজ এক্সট্রাকশন কলাম প্রস্তুত করুন এটি ধারাবাহিকভাবে 3 এমএল মেথানল এবং 3 এমএল 2% ফর্মিক অ্যাসিড দিয়ে সক্রিয় করে। প্রস্তুত সমাধানটি কলামে লোড করুন,ধারাবাহিকভাবে ২% ফর্মিক এসিড এবং মেথানলের ৩ মিলিলিটারে ৩ মিলিলিটার দিয়ে ধুয়ে ফেলুন, এবং ভ্যাকুয়ামের অধীনে শুকিয়ে যায়। 5% অ্যামোনিয়েটেড মেথানল সমাধানের 3 মিলিলিটার দিয়ে কলামটি এলুয়েট করুন। 50 ডিগ্রি সেলসিয়াসে নাইট্রোজেন প্রবাহের অধীনে শুকানোর জন্য এলুয়েটটি বাষ্পীভূত করুন। 0.5 মিলিলিটার মেথানলে অবশিষ্টাংশটি পুনরায় দ্রবীভূত করুন।১% ফর্মিক এসিড সলিউশন (10:90, v/v), পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করুন, এবং তরল ক্রোমাটোগ্রাফি-ট্যান্ডেম ভর বর্ণনাকরণের মাধ্যমে বিশ্লেষণের জন্য 0.22μm মাইক্রোপোরাস ঝিল্লি মাধ্যমে ফিল্টার করুন।

2.২ পরীক্ষার শর্ত

2.2.১ তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফিক অবস্থা

ক্রোম্যাটোগ্রাফি কলাম √ C18, 1.8μm 2.1*100mm

মোবাইল ফেজ: A: পানিতে 0.1% ফর্মিক এসিড; B: মেথানল

প্রবাহের হারঃ ০.৩ মিলি/মিনিট

কলামের তাপমাত্রাঃ ৪০°সি

ইনজেকশন ভলিউমঃ 3μL

3.সিস্টেম উপযুক্ততা পরীক্ষা

সিস্টেমের উপযুক্ততা পরীক্ষা থেকে দেখা যায় যে লক্ষ্যমাত্রা পিকগুলি পরীক্ষার প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে, অন্যান্য অমেধ্য পিকগুলির হস্তক্ষেপ ছাড়াই ভাল আকারের।

চিত্র ১ সাতটি β-agonist টেস্টের ক্রোম্যাটোগ্রাম (1ng/mL)

3.২ লিনিয়ার রেঞ্জ

β-agonist মান সমাধান গ্রহণ করে এবং মধ্যবর্তী ঘনত্বের কাজের সমাধান ব্যবহার করে, একটি মানক বক্ররেখা ধাপে ধাপে প্রস্তুত করা হয়েছিল।যেখানে R2 > 0.99, একটি ভাল রৈখিক সম্পর্ক নির্দেশ করে।

টেবিল 3 β-agonists এর জন্য লিনিয়ার পরিসীমা টেবিল

চিত্র ২ সাতটি β-Agonist এর স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ ক্রোম্যাটোগ্রাম

3.3 সনাক্তকরণের সীমা (LOD) এবং পরিমাণের সীমা (LOQ)

এই পদ্ধতিতে, β-agonists এর জন্য সনাক্তকরণের সীমা (LOD) এবং পরিমাণের সীমা (LOQ) যথাক্রমে 0.2ng/mL এবং 0.5ng/mL এ সেট করা হয়। এই পদ্ধতিতে প্রতিটি যৌগের জন্য,LOD এবং LOQ এর জন্য নির্দিষ্ট ঘনত্বের সিগন্যাল-রাইস অনুপাত 3 এবং 10 এর চেয়ে বেশি, যথাক্রমে পরীক্ষামূলক সংবেদনশীলতার প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।

টেবিল 4 প্রতিটি যৌগের LOD এবং LOQ এর জন্য সংশ্লিষ্ট সংকেত-শব্দ অনুপাত

চিত্র 3 LOD এবং LOQ ঘনত্বে সাতটি β-Agonists এর আয়ন ক্রোম্যাটোগ্রাম

3.4 যথার্থতা পরীক্ষা

ধারণ সময় এবং পিক এলাকার বিচ্যুতি তুলনা করার জন্য নিম্ন, মাঝারি এবং উচ্চ ঘনত্বের β- agonist স্ট্যান্ডার্ড পদার্থের একটি মিশ্র সমাধান নেওয়া হয়েছিল এবং পরপর ছয়বার ইনজেকশন করা হয়েছিল।ফলাফলগুলি নিচের টেবিলে দেখানো হয়েছেসমস্ত β-agonists পরীক্ষামূলক প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে 1% এরও কম ধরে রাখার সময় বিচ্যুতি এবং 3% এরও কম পিক এলাকা বিচ্যুতি দেখিয়েছে।

টেবিল ৫ প্রতিটি যৌগের জন্য নির্ভুলতা পরীক্ষা

চিত্র 4সাতটি β-agonists (6 ইনজেকশন) এর নির্ভুলতা পরীক্ষা ক্রোম্যাটোগ্রাম

3.5 নমুনা পরীক্ষা

বাজার থেকে কেনা গরুর মাংসের নমুনাগুলি উল্লিখিত প্রাক চিকিত্সা পদ্ধতি অনুসারে পরীক্ষা করা হয়েছিল এবং কোনও β-agonists সনাক্ত করা হয়নি।সাতটি β- agonists এর সাথে সম্পর্কিত ধারণের সময়গুলিতে কোনও ক্রোম্যাটোগ্রাফিক পিক পর্যবেক্ষণ করা হয়নি।, অন্য শীর্ষগুলি এনজাইমেটিক হাইড্রোলাইসিসের পরে ম্যাট্রিক্স সংকেতগুলি উপস্থাপন করে।

চিত্র ৫: শূকর মাংসের নমুনা পরীক্ষার ক্রোম্যাটোগ্রাম

4উপসংহার

এই পদ্ধতিতে শুকরের মাংসে β-agonists নির্ধারণের জন্য Wayeal LCMS-TQ9200 তরল ক্রোম্যাটোগ্রাফি-ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমেট্রি সিস্টেম ব্যবহার করা হয়।তথ্য দেখায় যে সমস্ত ক্রোম্যাটোগ্রাফিক পিকগুলি ভাল আকৃতি প্রদর্শন করে, সংবেদনশীলতা পরীক্ষামূলক প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে, রৈখিক সংশ্লিষ্টতা সহগ 0 অতিক্রম করে।99, এবং প্রতিটি যৌগের পরপর ছয়টি ইনজেকশনের জন্য 1% এর নিচে ধরে রাখার সময় বিচ্যুতি এবং 3% এর মধ্যে পিক এলাকার বিচ্যুতির সাথে নির্ভুলতা সন্তোষজনক।শুকরের মাংসের নমুনা পরীক্ষায় কোন β-agonists সনাক্ত করা হয়নিএই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে ওয়েয়েল এলসি-এমএস/এমএস সিস্টেমের সাথে সজ্জিত পদ্ধতিটি লক্ষ্য বিশ্লেষকগুলির জন্য রুটিন গুণগত এবং পরিমাণগত সনাক্তকরণের প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।